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【摘要】
目的研究天参益智胶囊对d-半乳糖所致衰老小鼠学习记忆的影响，探讨其抗衰老的作用及机理。方法采用morris水迷宫进行行为学测试，以gsh-px，sod，ache，chat，mda为指标，观察其对衰老小鼠学习记忆的影响。结果不同剂量的天参益智胶囊均能提高小鼠学习记忆成绩，使小鼠血清中gsh-px，sod及chat活性升高，ache活性及mda含量降低。结论天参益智胶囊对d-半乳糖所致衰老小鼠的学习记忆能力下降有明显保护作用，其作用机制可能与其抗氧化和抑制乙酰胆碱酯酶作用密切相关。
【关键词】 天参益智胶囊 d-半乳糖 学习记忆 衰老
abstract:objectiveto investigate the effect of tianshenyizhi capsule on learning and memory of aging mice caused by d- maze test was used to determine the learning and memory ability, the activities of gsh-px, sod, ache and chat, and content of mda in blood serum were measured respectively. resultscompared with model group, tianshenyizhi capsule in different dosages could improve the learning and memory ability of mice, increase the activities of gsh-px, sod and chat, and decrease activity of ache and content of mda in serum. conclusiontianshenyizhi capsule has significant protective effect against the decrease of learning and memory of aging mice caused by d-galactose and the mechanism to the elevation of antioxidase activity and decrease ache activity.
key words:tianshenyizhi capsule; d-galactose; learning and memory；senility
天参益智胶囊是在中医抗衰老经验方的基础上研制而成，该复方由天麻、人参等药材组成，具有补气健脑、扶正固本、开窍益智等功能。本 论文 旨在探讨该复方对抗衰老、改善记忆的作用机制，选用了d-半乳糖衰老动物模型，采用morris 水迷宫实验进行行为学测试，检测体内相关指标以验证其疗效并阐明其可能的作用机制。
1 材料与仪器
1.1 动物昆明种小鼠，雌、雄各半，体重（22 ±2）g，由贵阳医学院实验动物中心提供，合格证号：scxk（黔）2004-0001。普通饲料饲养，清洁级，光照时间12/12，室温22～23℃。
1.2 仪器morris水迷宫；bi 2000图像分析系统(成都泰盟公司产品) 。
1.3 药品与试剂天参益智胶囊（由贵阳医学院药学院分析化学教研室提供）；d-半乳糖（美国amresco公司）；健脑胶囊（青岛国风药业股份有限公司）。
2 方法
2.1 动物分组、造模方法及给药方案昆明种小鼠（雌、雄各半）进行morris水迷宫实验，直到定向航行实验成绩稳定为止（连续两天成绩差异无显著性）。将经morris水迷宫筛选合格的84只小鼠随机分为6组(n=14)，分别为正常对照组（ns 14 ml·kg-1）、模型组（ns 14 ml·kg-1）、复方高、中、低（天参益智胶囊1.52，0.61，0.30 g·kg-1）剂量组及阳性对照组（健脑胶囊，0.03 g·kg-1）。除正常对照组外，其余各组均采用皮下注射5％d-半乳糖溶液0.5 ml·kg-1造模，然后连续灌胃给药45 d。
2.2 morris水迷宫行为测试水迷宫［1,2］由圆形水池、安全岛和记录系统3部分组成。水池直径130 cm，高60 cm，水池内壁涂成乳白色。池中水深30 cm，水温保持在(24 ± 2)℃，用奶粉使池水浑浊。池壁标记4个入水点，将水池分为四个均等的象限，池壁上固定位置贴有一幅画作为参照物。安全岛置于第1象限中点，直径10 cm，高28 cm，距水面2 cm。记录系统为成都泰盟公司提供的bi 2000系统的行为学检测模块。从第39天开始进行定位航行实验，连续测试5 d。将小鼠从安全岛之外的3个象限任一入水点面向池壁放入置有安全岛的水池中，经bi 2000图像处理系统自动记录小鼠在120 s内找到安全岛的时间（逃避潜伏期）和游泳路径（搜索距离），并让小鼠在岛上停留10 s。超过120 s找不到安全岛的记为120 s，并引导小鼠上安全岛。定位航行实验结束后，间隔1天，拆除安全岛，将小鼠从同一入水点放入池中，记录小鼠在120 s内寻找安全岛过程中在原安全岛所在象限内的搜索时间（空间探索时间）及探索距离。
2.3 生化指标测定行为学测试结束后，小鼠眼眶采血，分离血清，测定小鼠血清中gsh-px，sod，ache，chat活性及mda含量。
2.4 统计学处理数据处理采用±s表示，组间均数比较采用方差分析和t检验。
3 结果
3.1 对d-半乳糖所致衰老小鼠学习记忆能力的影响对比模型组和给药组小鼠空间探索实验成绩，显示小鼠给药后学习记忆水平提高，探索时间缩短、探索距离减小，与模型组比较有显著性差异（p<0.05或p<0.01），提示天参益智胶囊对衰老小鼠的学习记忆能力有明显的改善作用。结果见表1。表1 小鼠空间探索实验结果（略）与正常对照组比较，*p< 0.05，**p< 0.01；与模型组比较，p< 0.05，p< 0.01；n=14
3.2 对d-半乳糖所致衰老小鼠血清中gsh-px和sod活性及mda含量的影响模型组小鼠血清中gsh-px和sod活性降低，mda含量升高，与正常对照组有显著性差异（p<0.05或p<0.01）。灌胃给药后小鼠血清中gsh-px和sod活性升高，mda含量降低，与模型组比较有显著性差异（p<0.05或p<0.01），提示天参益智胶囊具有较明显的抗氧化和减弱自由基损伤的作用。结果见表2。表2 对d-半乳糖所致衰老小鼠血清中gsh-px和so（略）与正常对照组比较，*p< 0.05，**p< 0.01；与模型组比较，p< 0.05，p< 0.01；n=14
3.3 对d-半乳糖所致衰老小鼠血清中ache和chat活性的影响模型组小鼠血清中chat活性降低，ache活性升高，与正常对照组有显著性差异（p<0.05或p<0.01）。灌胃给药后小鼠血清中chat活性升高，ache活性降低，与模型组比较有显著性差异（p<0.05或p<0.01），提示天参益智胶囊具有一定的抑制乙酰胆碱脂酶活性。结果见表3。表3 对d-半乳糖所致衰老小鼠血清中ache和chat活性的影响 （略）与正常对照组比较，*p< 0.05，**p< 0.01；与模型组比较，p< 0.05，p< 0.01；n=14
4 讨论
本实验用morris水迷宫观察了天参益智胶囊对d-半乳糖所致衰老小鼠学习记忆的影响。结果表明，天参益智胶囊明显改善了该模型小鼠的学习记忆能力，表现为明显缩短了空间探索实验中小鼠的探索时间和探索距离。
gsh-px和sod是体内重要的抗氧化酶类，在机体抗氧化损伤中起着重要作用。mda 是体内自由基对不饱和脂肪酸引发的脂质过氧化反应的最终分解产物，其含量的多少可以反映体内自由基的多少及其反应强度。mda 含量的增加可能是体内自由基生成异常或机体抗氧化保护系统的抗氧化能力减弱。天参益智胶囊明显提升了d-半乳糖所致衰老小鼠血中这两种酶的活性，同时降低了该模型小鼠血中mda的含量，说明其具有较明显的抗氧化活性。
中枢胆碱能系统与学习记忆功能密切相关。本研究显示天参益智胶囊能显著提高d-半乳糖所致衰老小鼠血中chat活性，抑制ache活性，提示天参益智胶囊改善中枢胆碱能系统功能是其增强模型小鼠学习记忆能力的基础。
以上实验结果提示天参益智胶囊抗衰老的作用机制与其抗氧化作用和乙酰胆碱酯酶抑制活性有关。
【 参考 文献 】
关键词 抗衰老 艾炷灸 D―半乳糖 NO NOS
NO在中枢神经系统(comS)中一种重要的生物信使分子，其分布很广泛，几乎没有脑区缺乏。NO在comS中具有双重作用，既有神经保护作用，也有神经毒性作用。NOS是NO产生的关键酶，可催化L―精氨酸形成NO，NOS存在于胞内可溶性部分，在体内主要有三种类型：神经元型(nNOS)、诱导型(iNOS)和内皮型(eNOS)。NOS的表达不是一成不变的，随着年龄增长，各种类型NOS表达水平会发生相应变化，NOS活性升高，增龄细胞中的NO生成也相应增多，从而改变了胞内NO水平。本研究通过D―半乳糖注射建立小鼠衰老模型，以脑组织NO含量和NOS活力为观察指标，探讨艾炷灸疗法对脑衰老变化情况的影响机制。
1、实验材料与方法
1.1 实验动物：健康3月龄昆明雌性小鼠体重30±2克33只，15月龄自然衰老小鼠10只，由广西中医学院动物中心提供。
1.2 主要试剂和仪器：D―半乳糖为上海试剂二厂生产，批号：20030406；生理盐水；NO试剂盒、NOS试剂盒、考马斯亮兰蛋白测定试剂盒(由南京建成公司提供)；SVNRISE型酶标仪，AUSTRIA制造；HH-8数显恒温水浴锅；液体快速混合器；JY92―ⅡD超声波细胞破碎机；Biofuge Stutos型高速低温离心机。
1.3 方法：33只小鼠编号后，按随机数字表，随机分为3组，即模型组、模型+艾炷灸治疗组、生理盐水对照组，每组11只(生理盐水对照组死亡1只)。参照文献将D―半乳糖与生理盐水按1.2(g)：100(ml)混匀为12mg/ml，艾炷灸治疗组和造模组每天以D―半乳糖按120mg/kg/d颈背部皮下注射(相当于每10g重量注射0.1ml浓度为1.2％的D―半乳糖溶液)，连续42天，同时生理盐水对照组颈背部皮下注射等量的生理盐水42天；艾炷灸治疗组在注射12天后开始艾炷灸治疗，时间选择上午9：00～11：30，选取小鼠双侧“足三里”(先灸)、“悬钟”(后灸)，隔天治疗1次，每穴3壮，共12壮。定位取穴按照林文注编《实验针灸学》和胡元亮编《实验动物针灸手册》，“足三里”在膝关节下方，腓骨小头下3mm处的肌沟中；“悬钟”在后肢外踝尖直上5mm腓骨后缘处。穴位选定后剪毛，施灸时涂凡士林以保护小鼠皮肤且便于固定艾炷，用米粒大艾炷(重为30mg)施灸，艾炷做得紧而结实，用线香点燃，当小鼠挣扎时(以局部红晕或潮红为度)更换艾炷。造模组及生理盐水组在12天后隔天进行同样时间同样程度的刺激。另将自衰组(比其他三组提前饲养45天)在同等饲养条件下饲养。治疗满30天后，将所有小鼠断头处死，立即取出大、小脑皮质匀浆、离心。NO含量的测定采用硝酸还原酶法，NOS测定用化学比色法，按试剂盒说明书要求测各项指标。(NO单位含量定义为每克蛋白中含有的微摩尔量；NOS活力单位定义：每毫升组织每分钟生成1nmol NO为一个酶活力单位。)数据统计应用SPSS13.0软件计算，各组数据以均数±标准差(x±s)表示，组间均数比较采用单因素方差分析检验。
2、结果
2.1 小鼠衰老模型脑组织NO含量变化：如表1所示，4组小鼠的大、小脑皮质NO含量具有显著性差异，其中：造模组大、小脑皮质NO含量与生理盐水对照组相比具有显著性差别(P0.05)，而小脑皮质NO含量明显高于自然衰老对照组(造模组与自然衰老对照组在大、小脑皮质中NO含量都明显升高，而自然衰老对照组小脑皮质NO含量升高不如造模组明显)，提示D―半乳糖所致的亚急性衰老小鼠脑内NO含量变化情况接近自然衰老小鼠；模型+艾炷灸治疗组大、小脑皮质NO含量与生理盐水组相比较无显著性差别(P>0.05)；与模型组、自然衰老对照组相比NO含量处于较低水平(P
2.2 小鼠衰老模型脑组织NOS活力变化：如表2所示，4组小鼠的大、小脑皮质NOS活力具有显著性差异，其中造模组与自然衰老对照组的大、小脑皮质NOS活力均增高，两者相比较均有非常显著性差别(P
3、讨论
D―半乳糖衰老模型是目前较多用的一种人工催老模型，具有衰老变化明显、模型稳定、耗时短等特点。D―半乳糖造成衰老模型是因代谢过程中机体产生大量自由基，其表现为多种抗氧化酶活性下降，引起小鼠的脑老化效应，并在多种器官、组织的形态及生理、生化的许多观测指标上，均呈现出与自然衰老相似的改变。本研究也证明：D―半乳糖致衰老小鼠和18月龄自然衰老的小鼠其大、小脑皮质中NO含量、NOS活力水平接近。
一氧化氮(NO)具有广泛的生物学作用，参与调节神经系统、心血管系统及呼吸消化系统的功能和介导免疫应答等诸多生理和病理过程，是体内重要的信使分子和神经递质，与脑部学习及记忆密切相关；同时又是一种极不稳定的强氧化剂，过量的NO则会作为强氧化剂与超氧阴离子发生反应，产生细胞毒性更强的过氧化硝基基团，对细胞产生毒性从而导致衰老的发生。NOS是NO产生的关键酶，NOS可催化L―精氨酸形成NO。增龄细胞中的NO生成也相应增多，这主要由于NOS活性升高所致。
你好！
自从你半年前搬到我家之后，我家便需要天天忍受你夜晚“吱吱”的叫声，忍受你用牙咬桌子腿。忍受你把我们的食物逐一尝遍，忍受你在米袋里畅游欲游，忍受你咬坏我们心爱的衣物。忍受……
无数无数个忍受，已经让我一忍再忍，不能再忍了！今天，我们一家人一起向你发起投诉！
还记得那一次吗？对！就是那次，你把我钥匙藏起来的那次！
那天，我和往常一样走进家门，开门了，将钥匙放在了桌子上。可是因为力度没有掌握好，钥匙落在了木板上，我并不放在心上，可是等我回过神来一看，钥匙居然没啦！
我自然焦急万分，把东西全部翻过了。又找了一边楼梯和回来时的路，这时候，一声“吱吱”露出了你的踪迹。“好啊！天堂有路你不走，地狱无门你自来。敢拿我的匙？真是太胆大了！
就这样，我追着你打了一下午，不知你是否还记得。最终。我抓到了你，在我的威逼利诱下，你终于老老实实地交代了钥匙的下落。
你这样的大大小小的“事迹”，就像是天上的星星一样数的数不清，就算说上个三天三夜都讲不完。而现在，我代表全家人正式向你发出投诉。
2013年11月25日
[摘要] 目的：对维药老鼠瓜中的硫苷进行提取分离，研究它对类风湿性关节炎大鼠的影响。方法：提取分离老鼠瓜中的硫苷， Freund’s 完全佐剂诱导法建立风湿性关节炎大鼠模型，设立正常组、模型组、雷公藤组、硫苷低、中、高剂量组(25，50，100 mg/kg) ，测量各组大鼠继发侧足厚度，进行疼痛评分和多发性关节炎指数评分。结果：本文制备了高纯度的硫苷结晶，经光谱鉴定确证为白花菜苷（glucocapparin）。与模型组相比，硫苷组大鼠佐剂性关节炎继发病变显著受抑制(P＜0.05)。结论：硫苷对大鼠类风湿性关节炎有良好的治疗作用。
[关键词] 老鼠瓜；硫苷；白花菜；大鼠；佐剂性关节炎
[中图分类号] R593.22 [文献标识码]B [文章编号]1673-7210（2008）02（c）-034-02
Extraction and anti-rheumatism effect of glucosinolates in the Capparis spinosa L.
JIANG Li-Juan1，MEI Li-Wan・ABDRYM 1*，HajiAkber・AISA2
(1.School of Pharmaceutical Sciences， Xinjiang Medical University， Urumqi 830054，China; 2.Xinjiang Technical Institute of Physics and Chemistry， Chinese Academy of Sciences， Urumqi 830011， China)
[Abstract] Objective:Extraction and separation of the glucosinolates from the Capparis spinosa L， discuss the effect of glucosinolates on adjuvant arthritis :The dry seed power was extracted with boiling MeOH， a glucocapparin was obtained by the recrystallization. Rats were randomly divided into the normal group and the model group， the small， medium， large dosages of glucosinolates group (25， 50，100 mg/kg)，Except for the rats in the normal group， animals were modeled to adjuvant arthritis with freund’s complete adjuvant. The arthritis index (AI)， the pain response andthe parameter of paws were recorded. Results:UV1，1H-NNR， 13C-NNR was set up to identify the structure. At last we got the crystallization of glucocapparin. Compared with the model group， glucosinolates was shown to exert a dramatic inhibitory effect on secondary reaction of Freund’s adjuvant arthritis of :Glucosinolates has a remarkable treatment effect on AA rats.
[Key words] Capparis spinosa L.; Glucosinolates; Glucocapparin; Rat;Adjuvant arthritis
老鼠瓜(Capparis spinosa L.)为白花菜科山柑属植物，又名槌果藤、刺山柑、野西瓜、钩瓜，在我国主要分布在新疆、甘肃和西藏[1]。其味辛苦，性温，具有祛风、散寒、除湿、止痛、调经、消肿的作用，维吾尔医用老鼠瓜治疗痛风和风湿性关节炎[2]。硫苷（glucosinolates，LG）是老鼠瓜主要的化学成分[3，4]，本文从老鼠瓜种子中提取分离硫苷类成分，考察了该组分对大鼠佐剂性关节炎(adjuvant arthritis，AA)的治疗作用。
1材料与方法
1.1实验动物与分组
Wistar 雄性大鼠[由新疆医科大学实验动物中心提供，动物质量合格证号：SCXK(新)2003-0001]60只，体重(180±20) g，随机分为6组：正常组，模型组，雷公藤组，LG高、中、低剂量组，每组10只。
1.2仪器及试剂
完全弗氏佐剂（CFA，Sigm公司）；雷公藤多苷片（福建汇天生物药业有限公司，批号070102）；老鼠瓜种子于2005年8月采集于新疆阿克苏地区。甲醇和乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。
SHIMADZU LC-20A高效液相色谱仪(日本岛津公司)，SHIMADZU SPD-M20A紫外检测器 (日本岛津公司)，电子分析天平（德国Sartorius公司），KQ-20KDE高功率数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），752型紫外分光光度计（上海仪器厂），INOVA-600型磁共振仪（美国VARIAN公司），Waters-600高效液相色谱仪（Waters公司），METFER AC．100型电子天平； 外径千分尺（上海量具刃具厂）；HSGF254硅胶板(青岛海洋化工厂)。
1.3方法
1.3.1 LG的提取根据文献[5]的方法，干燥的老鼠瓜种子1 000 g，于沸水浴中处理5 min。粉碎之后用1 500 ml 70％甲醇水溶液加热回流提取两次，合并提取液并过滤，滤液浓缩（500 ml），加入10 ml 0.5 mol/L的Pb(Ac)2-Ba(Ac)2溶液，放置后过滤，滤液浓缩至浸膏状。加入30％甲醇50 ml，加热使之溶解，在0℃以下放置，得到粗提物结晶0.82 g。用30％甲醇重结晶即得到针状甲基硫苷结晶0.55 g。
1.3.2硫苷对AA 大鼠关节炎的治疗作用
1.3.2.1 AA大鼠模型的建立与给药方法正常组每只大鼠右后足跖皮内注射0.1 ml生理盐水，其余组每只大鼠右后足跖皮内注射0.1ml CFA 致炎造模，各组动物致炎后18 d开始给药，每日1次， 每次1 ml，连续12 d。参照1.3.1方法，提取硫苷粗提物结晶5.0 g，用蒸馏水溶解为25、50、100 mg/ml的硫苷溶液，置冰箱内保存。雷公藤组每天10 mg/kg；LG低、中、高剂量组每天各25、50、100 mg/kg；正常组和模型组给予等量生理盐水。
1.3.2.2继发侧足厚度测定用千分尺测量AA 大鼠继发侧足厚度，从第一天给药前开始测量，每两天1次[7]。
1.3.2.3关节炎指数(arthritis index，AI)AA 大鼠全身关节病变按5级评分法评价，根据未注射佐剂的其余3只肢体的病变程度累积积分，计算出AI。0分：无红肿；1分： 小趾关节红肿；2分：趾关节和足趾肿胀；3分：踝关节以下的足爪肿胀；4 分：包括踝关节在内的全部足爪肿胀。把各个关节的积分累积起来，即为每只大鼠的AI。从第一天给药前开始观察并记录全身关节病变程度，每两天1次[7]。
1.3.2.4疼痛实验评分将大鼠装进固定器内，后腿及尾部伸出筒外，稳定几分钟后向脚掌侧缓慢屈曲左侧踝关节，每隔5 s进行1次，共5次。屈关节时大鼠出现嘶叫或短促而明显的缩腿反应评1分，无反应为0分，每只大鼠疼痛反应为0～5分。从第一天给药前开始评分，每两天1次[8]。
1.4统计学处理
采用SPSS 13.0软件进行统计学分析，组间比较用t检验，结果用x±s表示。
2结果
2.1 LG的结构鉴定
该结晶易溶于水，不溶于有机溶剂，与浓盐酸共热可产生硫化氢气体。紫外光谱图为单峰，最大吸收峰为223.8 nm，对应分子中S-C=N结构的硫苷特征紫外吸收波长。13C-NNR(D2O)δ16.6 d (C-8)，59.2 d (C-1)，67.7 d (C-3)，70.3 d (C-5)，75.6 d (C-4)，78.5 d (C-2)，80.2 d (C-6)，161.1 d (C-7)。1H-NNR(D2O)δ=4.89-4.19(1H，d，葡萄糖环上与硫原子相连的CH)，δ=3.27-3.75(6H，m，葡萄糖环上的CH)，δ=2.24(3H，S，-CH3)，δ=4.62为H2O峰。以上数据与文献[6]对比，确定为白花菜苷。
2.2硫苷对AA 大鼠关节炎的治疗作用
FCA致炎后第18 天，经胃灌服LG和雷公藤治疗，AA 大鼠全身症状明显改善。表现为活动增多，食欲增强，体重增加，体毛平滑较有光泽，继发性关节肿胀明显减轻，耳部红斑、尾根部结节发生率显著减少。与模型组比较，硫苷组对AA 大鼠继发性足跖肿胀、关节炎指数及疼痛反应均具有抑制作用(P＜0.05 或P＜0.01)，其中高、中剂量LG效果与雷公藤相近(P＞0.05)。结果见表1～3。
3讨论
类风湿性关节炎是一种以慢性多发性关节炎为主要表现的全身性自身免疫性疾病。大鼠佐剂性关节炎动物模型是用FCA免疫敏感种系大鼠所诱发的一种发病机制和病理特征与人类类风湿性关节炎相似的动物多发性关节炎模型。
国外对老鼠瓜的药理研究证明，老鼠瓜的水提液具有抗菌、杀虫、保肝、抗炎、抗氧化、降血糖、降血脂的作用。在新疆，老鼠瓜治疗痛风和风湿性关节炎的作用已经得到了广泛的认可。但是对于老鼠瓜发挥药理作用的机制，目前还没有相关的研究报道。本研究结果表明，高、中、低剂量硫苷灌胃治疗，均能改善AA 大鼠关节及关节外炎性症状，使关节肿胀程度和关节炎炎性指数显著下降，严重程度明显减轻。另外，本实验发现不同剂量硫苷灌胃治疗，AA大鼠的大体症状相似，关节肿胀程度和关节炎指数无明显差异。实验结果表明老鼠瓜中的硫苷具有良好的抗风湿性应用前景。
[参考文献]
[1]新疆植物志编辑委员会。新疆植物志[M].第2卷第2分册。乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1995.35.
[2]刘勇民。维吾尔药志[M].下册。乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999.868.
[3]Matthaus B，zcan M.Glucosinolate composites of young shoots and flower buds of capers (capparis species) growing wild in Turkey[J].Agric FoodChem，2002， 50(25):732.
[4]MATTHAUS B，zcan M. Glucosinolates and Fatty Acid， Sterol，and Tocopherol Composition of Seed Oils from Capparis spinosa Var.spinosa and Capparis ovata Desf. Var.canescens(Coss.) Heywood[J]. J.Agric Food Chem，2005，53:7136.
[5]袁丽凤，郭伟强，王志刚。 油菜籽中4-戊烯基硫代葡萄糖苷的分离、提纯及结构鉴定[J].分析化学研究简报，2004，32（11）:1513.
[6]Ahmed ZF,Rizk AM,Hammouda FM,et al.Glucosinolates of Egyptian Capparis species[J].Phytochemistry，1972,11:251.
[7]徐淑云，卞如濂，陈修，等。药理实验方法学[M].第3版。北京：人民卫生出版社，2002.913.
[8]Pezet S，Onteniente B，Jullien J，et al.Differential regulation of NGF receptors in primary sensory neurons by adjuvant-induced arthritis in the rat[J]. Pain，2001，90 (122)：113-125.
关键词：苦荞茶；SOD；MDA；衰老小鼠
文献标识码：A
Abstract：Objective To study tartary buckwheat tea on enzymes in kidney tissue of aging mice induced by D-galactose. Methods To use animal experimental method of Superoxide dismutase （SOD），malondialdehyde （MDA） in male mice after debilitating. Results Activity of SOD in kidney tissue of the aging model mice was signi？cantly lower than that of blank control group and the tartary buckwheat tea middle and high dose groups；content of MDA in kidney tissue of the aging model mice was signi cantly higher than the blank control group and the experimental groups. Conclusion Tartary buckwheat tea had significantly improved the activity of SOD of aging mice induced by D-galactose，decreased the content of MDA significantly.
Key words：Tartary buckwheat tea；SOD； MDA；Aging mice
苦荞主要分布在我国的西南云贵高原以及北方的陕西、山西、河北、内蒙一带[1]。苦荞味苦，性平寒，能实肠胃，益气力，续精神，利耳目，炼五脏渣秽，主治胃脘胀痛、消化不良、痢疾、腰腿痛、跌打损伤、痈肿恶疮、狂犬咬伤等症。研究表明，苦荞黄酮具有较强的抗氧化作用，具有清除自由基的能力，相关研究认为其清除超氧化阴离子自由基的能力要远远强于茶多酚[2]。本研究通过建立动物模型，了解苦荞茶对衰老小鼠肾组织SOD、MDA的影响，探讨苦荞茶的抗衰老作用。
1 资料与方法
1.1实验材料
1.1.1实验动物 实验动物为昆明种雄性小鼠，体重（20.89±2.62）g，购自内蒙古大学实验动物中心，为清洁级动物，合格证号：SCX（蒙）2002-0001。
1.1.2实验主要试剂 D-半乳糖、批号060227、美国Amresco公司，超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒，批号 20130205，南京建成生物工程研究所；丙二醛（MDA）检测试剂盒，批号20130104，南京建成生物工程研究所；苦荞茶，包头市某食品有限公司生产。
1.1.3主要仪器设备 高速台式离心机TGL-16B，仪表恒温水浴锅，S-Z型快速混匀器，T6分光光度计，电光分析天平TG328A。
1.2 方法
1.2.1动物分组及处理 将60只健康昆明种雄性小鼠按体重随机分为5组，每组12只，分别为空白对照组、衰老模型组、苦荞茶低剂量组、苦荞茶中剂量组和苦荞茶高剂量组。其中苦荞茶低、中和高剂量组分别按苦荞茶2.5g/kg、5g/kg、10g/kg的剂量给予。实验期间空白对照组每日腹腔注射生理盐水0.12g/kg，其余4组每日腹腔注射D-半乳糖0.12g/kg，连续6w，适应性喂养4w开始灌胃，空白对照组和衰老模型组以凉白开进行灌胃（5g/kg）/d，其余组按相应的苦荞茶剂量进行灌胃，连续进行6w。实验期间，1次/w称体重。第42d断头处死小鼠，称体重，取小鼠的肾组织测定其SOD活性和MDA含量。
1.2.2肾组织匀浆的制备 处死小鼠后，迅速取出小鼠的肾组织，采用手工匀浆，刨离干净，用冷生理盐水冲洗，出去血液，并用滤纸吸干，放在5ml的小烧杯中，用移液管向盛有脏器的烧杯中加入4.5ml的冷生理盐水，然后用眼科小剪迅速剪碎组织，放入玻璃匀浆管，补足冷生理盐水制成10%组织匀浆，然后用离心机3500转/min，离心10min，取适量上清液进行肾组织SOD活性和MDA含量测定。
1.3数据处理及统计分析 实验所有数据以表示，采用SPSS17.0统计软件进行分析，用方差分析比较其组间差异。
2 结果
2.1各组小鼠体重变化情况 研究结果发现，在实验进程中，实验组和对照组小鼠体重均有增加，空白对照组与苦荞茶3个剂量组之间平均体重之间变化无差异（P>0.05），而衰老模型组与其他4组之间平均体重有显著性差异（P
2.2各组小鼠肾组织SOD测定结果比较 研究结果发现，衰老模型组与空白对照组比较有统计学差异（P
2.3各组小鼠肾组织MDA含量测定结果比较 与空白对照组相比，衰老模型组小鼠MDA含量显著增加，而苦荞茶低、中、高剂量组均可明显降低衰老小鼠MDA含量，差别有统计学意义（P
3 讨论与结论
衰老是人体正常新陈代谢的结果，主要与机体内部机能的减退有关，随着年龄的增长，身体的生理功能和形态结构不断退化，最终表现为衰老。当前，众多学者致力于衰老原因与机制的研究，关于衰老的学说，学术界众说纷纭，最终认为衰老主要与自由基学说有关，即通过改变体内的氧化防御系统来消除自由基，最终起到抗衰老的作用。衰老模型的建立是进行衰老研究的关键，给动物注射大剂量D-半乳糖（D-Gal）后，会引起全身代谢紊乱，不能被细胞进一步代谢，因而堆积在细胞内，影响正常渗透压，使多器官功能衰退，最终导致衰老的发生[3]。大量实验已经证实了自由基的致衰老作用， D-半乳糖衰老模型也得到了自由基衰老学说的支持和验证[4]，其衰老趋势在发展过程中与自然衰老趋势基本一致[5]。本研究显示，在对小鼠连续6w注射D-半乳糖后，衰老模型组各项指标与空白对照组比较，差异均具有统计学意义（P
SOD是体内唯一1种能够清除氧自由基的酶，一般情况下，对维持体内氧化体系的平衡意义重大[6]。长期以来，SOD被作为研究衰老与抗衰老的经典指标。本实验结果表明：苦荞茶能明显提高D-半乳糖所致衰老小鼠肾组织SOD活性，清除多余的自由基，这说明饮用苦荞茶可以使机体中的SOD升高，使其抗氧化能力提高，清除自由基，对机体的抗氧化及抗衰老有促进作用。
MDA作为脂质过氧化的降解产物，它的含量可间接反映细胞受自由基损伤的程度，随着机体的衰老，MDA含量会逐渐增加，也是公认的衰老指标[7]。本实验中，苦荞茶低、中、高剂量组均可明显降低衰老小鼠MDA含量，抑制脂质过氧化，起到延缓衰老的作用。
综上所述，苦荞茶可对D-半乳糖所致衰老小鼠肾组织的SOD活性的下降有一定的回升作用，对MDA含量升高有一定抑制作用，具有抗氧化功能，延缓衰老。其抗衰老机制很可能与其提高衰老小鼠机体抗氧化能力，抑制脂质过氧化有关。这为今后苦荞茶抗衰老作用的研究提供了一定依据。
参考文献：
[1]姜忠丽，赵永进。苦荞麦的营养成分及其保健功能[J].粮食与食品工业，2003（4）：33-35.
[2]王敏，魏益民，高锦明。苦荞黄酮的抗脂质氧化和红细胞保护作用研究[J].中国食品学报，2006，6（1）：278-283.
[3]许扬，吴涛，顾佳黎，等。 D-半乳糖诱导衰老动物模型研究进展[J].中国老年学杂志，2009，13：1710-1713.
[4]龚国清，徐黻本。小鼠衰老模型研究[J].中国药科大学学报，1991，22（2）： 101-103.
[5]洪亮，方胜。三种不同方法建立小鼠衰老模型的比较[J].中国老年学杂志，2010，18：2607-2608.